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产品简介：
本试剂盒采用可以高效、专一结合DNA的硅基质材料和独特的缓冲液系统，从聚丙烯酰胺凝胶上回收DNA片段，同时除去蛋白质、其它有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。使用本试剂盒回收的DNA可适用于后续各种常规操作，包括酶切、PCR 、测序、文库筛选、连接和转化等实验。操作步骤：
第一次使用前请先在15ml漂洗液中加入60ml无水乙醇，所有离心步骤均可使用台式离心机在室温下离心。
1 ．将单一的目的 DNA条带从聚丙烯酰胺凝胶中切下（尽量切除多余部分），放入 1.5ml 离心管中，称取重量，用研磨杵将胶尽量挤压碎。加入 2 倍体积的溶液A 吹打混匀（每 100mg 胶加入200ul 溶液A），75℃水浴30分钟。
2 ．用1ml 的去尖吸头吸取混合物至过滤柱中（将胶一起吸入，溶液过多时可分次加入）。13,000rpm 离心1分钟。将收集管中的滤出液转入新离心管中。
3. 取六倍体积溶液 B 加入原离心管中（每 100mg 胶加入600ul），清洗管壁后加入过滤柱中(溶液过多时可分次加入)，颠倒过滤柱或轻轻吹打几次混匀，13,000rpm 离心1 分钟。将所有收集的滤出液混合。
4 ．将总滤出液混匀后加入吸附柱中（溶液过多时可分次加入），13,000rpm 离心30-60 秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放入收集管中。
5 ．向吸附柱中加入 600μl 漂洗液（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），13,000rpm 离心30-60 秒，倒掉废液，将吸附柱重新放入收集管中。
6 ．向吸附柱中加入 600μl 漂洗液，13,000rpm 离心30-60 秒，倒掉废液。
7 ．将离心吸附柱放回收集管中，13,000rpm 离心2 分钟，尽量除去漂洗液。将吸附柱开盖置于室温 1-2 分钟，彻底晾干，以防止残留的漂洗液影响下一步的实验。
8 ．将吸附柱放到一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量 65–70℃预热的洗脱缓冲液 20-30μ l ，室温放置2 分钟。13,000rpm 离心2 分钟收集DNA溶液。注意：①为了增加回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，13,000rpm 再次离心1 分钟。②洗脱缓冲液体积不应少于 20 μ l ，体积过小影响回收效率。③洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5 之间。
9 ．DNA回收产物直接后续实验或者-20 ℃保存。
注意事项：
1 ．电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
2 ．切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对 DNA造成损伤。
3 ． 本试剂盒对<50bp DNA 片段回收效率偏低（30% 左右），如要回收，应加大结合液的体积，延长吸附和洗脱的时间。
4 ．回收率与初始DNA量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越小，回收率越低。 |
