内毒素(endotoxin)原称热原，是革兰氏阴性菌细胞壁外膜及其它微生物细胞壁的主要组成成分，其化学本质为脂多糖，主要由O-特异性链、核心多糖和类脂A三部分组成。脂多糖共价连接到非极性的疏水性类脂A(Lipid A)形成带负电荷的大分子，同时还具有一个亲水性的寡糖核，因而具有疏水和亲水双重性质。制备质粒DNA和重组蛋白时，细菌破壁之后将释放大量脂多糖。无论是普通制备纯化程序，还是离子交换、凝胶排阻过滤，甚至是氯化铯超速离心等高级制备程序，脂多糖任不可避免地与DNA或蛋白质牢固结合而被共同纯化。脂多糖具有强烈的免疫活性和细胞毒性，并能产生多种复杂的细胞生物学效应，大多数情况下会明显干扰并产生不可预测的实验结果。例如在DNA转染实验中，内毒素竞争性干扰转染试剂与DNA的结合，显著降低转染效率，并产生明显细胞毒性降低外源基因表达水平。

本公司生产的内毒素清除剂主要用于清除DNA、蛋白质或其他液体样品中的内毒素。在特定的pH值、盐浓度和温度条件下，内毒素清除剂能与DNA、重组蛋白以及液体样品中的内毒素特异性结合，经过室温高速离心后，DNA或蛋白质等保留在水相，而内毒素则被浓缩到极小体积的下层相而被清除。经过3次以上重复抽提后可将活性为5000～50000 EU/ml的内毒素水平降低到5～0.5 EU/ml以下，即降低1000～10000倍。本试剂4℃可储存半年，-20℃长期储存。

操作步骤：

提取前请将内毒素清除剂放在冰上冰浴5min，期间翻转瓶子数次使试剂均匀预冷。

1、a)已纯化的质粒DNA内毒素清除：吸取500μl DNA溶液于微型离心管，加入1/10体积3M NaAc pH5.2或1/20体积5M NaCl溶液，冰浴5min。

   b)在提取质粒DNA过程中清除内毒素：以碱裂解法提取质粒为例，在加入裂解液和中和液并离心去除碎片之后，吸取含质粒DNA的上清于新离心管中，冰浴5min。

2、加入1/5体积预冷的内毒素清除剂，振荡混匀，溶液变浑浊。

3、冰浴5min，溶液应变清亮。

4、37℃水浴5min，不时振荡，溶液又变浑浊。

5、12000rpm室温离心5min，溶液应分为两相，上层水相含DNA，下层油状相含内毒素。

6、将含DNA的上层水相转移到新管，弃油状相，重复抽提三次，即重复步骤2-6三次。

7、加入2.5体积无水乙醇，-20℃沉淀30min或过夜；12000rpm离心10min，弃上清；加入70％乙醇洗涤沉淀，12000rpm离心5min弃上清；空气干燥沉淀，加入100～200μl无内毒素的高纯水或TE溶解沉淀。

8、用内毒素检测试剂测定样品中内毒素活性，并与初始样品比较。

注意事项：

1、DNA浓度>1mg/ml时清除内毒素效率降低。由于DNA和蛋白质本身的性质，清除程序可导致10-20％DNA丢失，所幸的是与清除内毒素的艰难相比DNA更容易提取制备。

2、所有溶液应用无内毒素的高纯水配制，所有器械材料均应不含内毒素，玻璃器皿可高温烘烤，非挥发性水溶液可高压120℃高温处理。