Folin-酚试剂法包括两步反应：第一步是在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物；第二步是此络合物将Folin试剂还原，产生深蓝色，颜色深浅与蛋白质含量成正比。定量范围为5～100μg/ml蛋白质。Folin试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起，因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用。此外，不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。

操作说明：

  1.根据需要量，取适量Folin酚甲试剂A和B按50:1混合，混合后有效期为24小时，过期失效。

  2.根据需要量，取适量BSA标准品用PBS稀释稀释10倍至浓度0.5mg/ml。

若采用酶标仪法(96孔)

  3.将标准品按0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20ul加到96孔板中，加PBS补足到20ul。

  4.将样品作适当稀释(最好多做几个梯度)，加20ul到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点误差比较大，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。

  5.将配好的Folin酚甲试剂每孔加入200ul，轻轻震动，混匀，室温放置10分钟。

  6.各孔加入20微升Folin酚乙试剂，迅速混匀，37℃放置30分钟。用酶标仪测定A650计算蛋白浓度。

若采用分光光度计法（接上述步骤2）

  3.取八支（或者更多）5ml离心管，标号，按下表加入试剂。

  4.混匀，37℃放置30分钟。分光光度计测定A650计算蛋白浓度。