单增李斯特显色培养基用于分离和初步鉴别单增李斯特菌。

　　【检验原理】

　　蛋白胨、酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;色素与单增李斯特氏菌具有的酶发生特异性反应，水解底物，释放出显色基团，在平板上，单增李斯特氏菌呈现绿~蓝绿色的光滑规则的小菌落;抑制剂和配套试剂可抑制杂菌的生长。

　　【单增李斯特显色培养基配方成分】

配方(每升)

含量

蛋白胨

15.0g

酵母膏粉

5.0g

琼脂

15.0g

氯化钠

5.0g

色素

2.3g

抑制剂

5.0g

去离子水(平板)

1000ml

　　最终pH 7.1±0.2(25℃)

　　【使用方法】

　　1.称取单增李斯特显色培养基干粉47.3g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，充分溶解，121℃高压灭菌15min，冷至50℃左右。

　　2.取10支配套试剂分别加入1mL无菌水，使之完全溶解。

　　3.将配套试剂加入到已冷至48℃左右基础培养基中，充分混匀后倾注无菌平皿。

　　4.按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液，进行增菌培养后，用接种环取1环增菌液，划线接种于显色平板上，置于36±1℃培养24-48小时。

　　5.观察结果。致病性李斯特24h后开始出现蓝绿色，至36～48h蓝绿色明显。挑取显色平板上呈蓝绿色光滑规则，直径约1～2mm的可疑单菌落进行进一步的试验。

　　6.对疑似单增李斯特氏菌菌落可使用HK-MID Listeria或API20E或生化管进行下一步的鉴定。

　　注：如产品类型为干粉，按上述1-6进行操作;若为即用型平板，按4-6进行操作即可。

　　【质量控制】

　　1.外观方面

　　干粉基础：流动性良好的淡黄色粉末。配套试剂：淡黄色冻干粉。

　　制备好平板：淡黄色不透明凝胶。

　　2.生物学方面

　　下列菌株接种单增李斯特氏菌显色培养基后于36±1℃培养24-48h生长情况如下表：单增李斯特氏菌质控图

　　【储存条件及保质期】

　　干粉培养基：2～8℃避光保存，用后立即旋紧瓶盖。贮存期两年。

　　配套试剂：2～8℃避光保存。贮存期两年。

　　即用型平板：2～8℃避光保存，最多一周。

　　【注意事项】

　　1、称量时注意粉尘，佩戴口罩操作以避免引起呼吸道系统不适。

　　2、干粉培养基使用后立即旋紧瓶盖，避免吸潮结块。

　　3、自制平板时需注意培养基的厚度，厚度过薄容易造成琼脂水分保持性下降，开裂;因此，一般需要15-20mL(Φ90mm)体积培养基，平板培养基厚度至少为2mm。

　　4、即用型成品平板应该尽量保持在2-8℃下保存且与存放容器冷凝管保持一定距离以避免冻损坏。产品多次在低温与常温之间变更会引起琼脂的泌水，属于正常现象。使用前应平衡至室温且尽量在无菌干燥箱中预干燥。

　　5、质检报告可以登录环凯网站http://www.huankai.com，打开“客服中心”页面，输入产品批号下载。

　　【废物处理】

　　检测之后带菌平板置于121℃下高压灭菌30分钟后处理。

配套试剂：2～8℃避光保存。贮存期两年。

即用型平板：2～8℃避光保存，最多一周。